(1) Laboratorio de Investigación del Proyecto Mercurio,

Resumen. Lepidium meyenii (Maca) es un recurso vegetal oriundo de los andes centrales del Perú que ha alcanzado relevancia internacional debido a sus propiedades medicinales que se le atribuyen. Es así que dentro de los principales componentes activos que presenta, se encuentran las macamidas, amidas secundarias formadas por bencilamina y un resto de ácido graso, con longitudes de cadena y grado de insaturación variables². En el presente trabajo se identificó y cuantificó por HPLC-DAD, N-(3-metoxibenzyl)-tetradecanamide(1), N-benzylhexadecanamide(2), N-(3-metoxibenzyl)-hexadecanamide(3), N-benzyloctadecanamide(5), N-benzyltetracosanamide(11); presentes en los extractos pentánicos obtenidos por re-extracción continua líquido-líquido de extractos metanólicos de los ecotipos amarilla, negra y roja. Para lo cual se requirió un proceso de adecuación y estandarización de la técnica analítica cromatográfica usando una fase estacionaria C-18 y una fase móvil compuesta de acetonitrilo y agua acidificada en gradiente, a una temperatura de 30°C y un flujo de 0.5 mL/min, alcanzando un LOD y LOQ entre 0.10 y 0.64 μg/mL y un porcentaje de recuperación entre 80.91% - 101.26%. Las concentraciones halladas estuvieron en un rango entre 35.57 y 0.075 mg/g de hipocótilos de maca seca. Siendo el ecotipo amarillo el que presentó la mayor cantidad de estas macamidas.

Palabras clave: Lepidium meyenii, macamidas, ecotipos.

.Abstract. Lepidium meyenii (Maca) is a native resource of the central Andes of Peru that has achieved international importance due to its medicinal properties. The main active components presents in this plant are the macamides, secondary amides formed by benzylamine and a rest of fatty acid, with variable lengths of chain and degree of unsaturation. In the present work were identified and quantified by HPLC-DAD, N-(3-metoxibenzyl)-tetradecanamide(1), N-benzylhexadecanamide(2), N-(3-metoxibenzyl)-hexadecanamide(3), N-benzyl-octadecanamide(5), N-benzyl-tetracosanamide(11); present in the pentanic extracts obtained by liquid-liquid continuous partition of methanolic extracts of yellow, black and red ecotypes. It was required a process of adaptation and standardization of the chromatographic analytical technique using a stationary C-18 and a mobile phase composed of acetonitrile and water acidified applied in gradient, at a temperature of 30° C and a flow of 0.5 mL/min., reaching a LOD and LOQ between 0.10 and 0.64 μg/mL and a percentage of recovery between 80.91% - 101.26%. Macamides found concentrations were in the range between 35.57 y 0.075 mg/g of dry maca. Being yellow ecotype that presented the highest amount of these macamides.

Keywords: Lepidium meyenii, macamides, ecotypes.

INTRODUCCIÓN

Lepidium meyenii conocida como Maca o Ginseng peruano, se le ha descrito como una planta herbácea que pertenece al género Lepidium y a la familia Brassicaceae y es considerada como la planta peruana con un alto potencial de bioprospección^2,4,11,10. El enfoque está en su raíz tuberosa que fue domesticada en la época Pre-inca, por sus múltiples usos nutricionales y terapéuticos, entre los efectos beneficiosos destacan la actividad neuroprotectora, estimulante del sistema nervioso central (actuando como antidepresivo, disminuye la ansiedad y analgésico), anti-proliferativa en el cáncer de próstata, también demostró proteger las células contra el estrés oxidativo⁴, antifatiga ,anti-osteoporosis, mejora la función sexual y mejora la fertilidad^5,6,7,10. Crece entre los 3000 a 4000 metros de altitud en diferentes partes de la sierra peruana, tradicionalmente en las regiones de Junín y Pasco y se han descrito 13 ecotipos de Maca de acuerdo a el color de sus hipocótilos lo cual está influenciado por los factores ambientales (el entorno de siembra, incluida la altitud, clima y fertilidad del suelo y el mismo proceso de secado)² que no solo puede causar cambios en el color de la raíz de Maca sino que va a causar variaciones en la composición de la Maca, por lo que se vio por conveniente identificar y cuantificar la presencia de 5 macamidas en 3 ecotipos de maca cultivados y secados en la región Junín.

MATERIALES Y MÉTODOS

Material vegetal: Los hipocótilos secos de las variedades negra, roja y amarilla de Lepidium meyenii fueron obtenidos en la localidad de Cerro de Pasco, provincia de Junín y colectados en el mes de octubre del 2015

Solventes y reactivos: acetonitrilo y metanol de calidad HPLC (Merck peruana), mientras que el ácido trifluoroacético (TFA) y n-pentano, grado P.A. (Merck peruana). Los estándares de macamidas utilizados N-(3-metoxibenzyl)-tetradecanamide(1), N-benzylhexadecanamide(2), N-(3-metoxibenzyl)-hexadecanamide(3), N-benzyl-octadecanamide(5), N-benzyltetracosanamide(11) fueron proporcionados por el Laboratorio de Farmacología del MCPHS University de Boston, USA.

Método de extracción: la obtención de los extractos pentánicos, se realizó en dos etapas. En la primera etapa se obtuvo el extracto metanólico por el método de Soxhlet a partir de 50 g de los hipocótilos triturados. Una vez obtenidos los extractos metanólicos de maca, se inició con la segunda etapa, la re-extracción continua líquido –líquido con n-pentano por un tiempo de 9 horas. Una vez terminada la re-extracción, se procedió a evaporar el solvente orgánico, de esta manera se obtuvieron los extractos secos y se calculó los porcentajes de rendimiento

Análisis cuantitativo, el ensayo se realizó en un sistema HPLC HITACHI Primaide, equipado con una bomba cuaternaria, un desgasificador de vacío en línea, un inyector automático, un detector de arreglo de diodos y un horno de columna. La separación cromatográfica adecuada de macamidas en los extractos pentánicos de hipocótilos de Maca se obtuvo en una columna Thermo Scientific, Hypersil Gold C18 (250x4mm, 5µ) utilizando como Fase móvil A (acetonitrilo) y Fase móvil B (solución acuosa de TFA 0.005%) en un programa de elución en gradiente: 0 a 24 min, 80% a 100% de A., seguido de 24 a 32 min 100% de A y finalmente de 34 a 40 min 80% y 20%, con un flujo de 0,5 mL/min. La longitud de onda se ajustó a 210 nm y la temperatura se ajustó a 30 °C. Una vez encontradas las condiciones cromatográficas adecuadas se procedió a la estandarización del método se llevó a cabo en función de la regresión lineal, la sensibilidad, la repetibilidad y la recuperación. La calibración se llevó a cabo a partir de soluciones stock de 200 μg/mL de cada macamida en metanol, a partir de ellas se prepararon diluciones en un rango de concentraciones de 0.25 a 50 μg/mL. La cuantificación de las macamidas en cada uno de los extractos, fueron expresados en μg/g de maca seca. Todas las determinaciones fueron llevadas a cabo por triplicado y los resultados son expresados en el valor promedio

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Sabiendo que las macamidas son un grupo de compuestos apolares presentes únicamente en Lepidium meyenii, es que se vio por conveniente obtener la fase apolar del extracto metanólico entero. Una vez terminada la extracción se procedió a evaporar el solvente no polar, obteniendo un rendimiento de 1.68%, 1.72% y 2.01% para el ecotipo de maca negra, roja y amarilla respectivamente (Figura 1). Los extractos obtenidos presentaron un color café oscuro intenso, textura/ consistencia pegajosa y un olor sui generis.