ESTUDIO COMPARATIVO DE LOS EFECTOS MIOTÓXICOS E INFLAMATORIOS POR ACCIÓN DE FOSFOLIPASAS A2 NATIVAS Y MODIFICADAS QUÍMICAMENTE PROCEDENTES DE VENENO DE Bothrops andianus.

Adolfo Román Ramos Paredes ¹, Wilmer Julio Paredes Fernández ²

(1) Laboratório de Fisiologia Animal, Facultad de Ciencias Biológicas, Departamento Académico de Biología, UNSA.

(2) Laboratório de Bioquímica, Facultad de Ciencias Biológicas, Departamento Académico de Biología, UNSA

RESUMEN: En el presente trabajo de investigación se logró purificar en tres pasos cromatográficos por exclusión molecular en Sephadex G-75, intercambio iónico (catiónico) SP 5PW (Waters) e hidrofobicidad en una columna µ-Bondapack C-18 (Waters, CA. USA) en una combinación de cromatografía convencional y de alta eficiencia, una fosfolipasa A₂ con efecto miotóxico, a partir del veneno total de Bothrops andianus. La miotóxina PLA₂ tiene una masa molecular en torno a 13 KDa en la electroforesis de poliacrilamida en presencia de dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) y se obtuvo con una alta homogeneidad.

La composición de aminoácidos de la miotóxina PLA₂ aislada del veneno de Bothrops andianus indica que se trata de una proteína de carácter básico. La miotóxina PLA₂ aislada a partir del veneno de Bothrops andianus tiene una actividad miotóxica local. Una dosis de 20 µg de esta fosfolipasa a nivel intramuscular provoco un aumento drástico de los niveles séricos de creatin kinasa a las 4 horas después de su administración (1373,11±55,17 U/L). La actividad mionecrotica revela que la fracción aislada presenta actividad miotóxica, ya que la lesión muscular producida por la fracción fue típicamente mionecrótica, induciendo perdida de la estructura de las fibras musculares.

Palabras Clave: Bothrops andianus, fosfolipasa A₂, miotoxina, inflamación, interleuquinas

ABSTRACT: In the present research work, it was possible to purify in three chromatographic steps by molecular exclusion in Sephadex G-75, ion exchange (cationic) SP 5PW (Waters) and hydrophobicity in a μ-Bondapack C-18 column (Waters, CA USA) In a combination of conventional and high efficiency chromatography, a phospholipase A2 with a myotoxic effect, from the total venom of Bothrops andianus. Myotaxin PLA2 has a molecular mass around 13 KDa in polyacrylamide electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE) and was obtained with high homogeneity. The amino acid composition of the myotoxin PLA2 isolated from the Bothrops andianus venom indicates that it is a basic protein. Myotoxin PLA2 isolated from the venom of Bothrops andianus has local myotoxic activity. A dose of 20 μg of this phospholipase intramuscularly caused a drastic increase in creatinine kinase levels 4 hours after administration (1373.11 ± 55.17 U / L). The myonecrotic activity reveals that the isolated fraction presents myotoxic activity, since the muscular injury produced by the fraction was typically myionecrotic, inducing loss of

Keywords: Bothrops andianus, phospholipase A2, myotoxin, inflammation, interleukins